| Analitika Ca, osnov i priprema uzorka | Priprema uzoraka, kad je u pitanju ukupni Ca2+ (ukupni + jonizirani) :
Moguće je koristiti serum, heparizirana plazma, urin
Urin : prezervacija sa 5-10 ml 6M HCl
Ca jonizirani, uzorci:
serum, heparizirana krv |
| UKUPNI Ca metode nabrojati | 1. 1. Plamena emisiona spektrometrija
2. AAS
5. SPEKTROFOTOMETRIJSKE METODE
3. Masena spekrometrija--- definitivna metoda
4. Titrimetrijske metode- Stvaranje fluoroscentnih kompleksa sa Ca |
| 1. Plamena emisiona spektrometrija - osnove reakcije i emisija | Ca2+ + toplota + 2e- ----> Ca0----> toplota----> fotoni
422,7nm
554 nm
622 nm
Ne koristi se radi interferencija... |
| 2. AAS kalcija - kako se izvodi | a) Prvo moramo reducirati interferencije:
Faza dilucije 1:50 sa lantan – HCl
b) Aspiracija u zrak/acetilen
c) Apsorbanca proporcionalna broju atoma Ca u ground stanju |
| AAS kalcija interferencije | Smetaju fosfati i oksalati i dodajemo stroncij da ih blokiramo
Smetaju i proteini a za njih dodajemo perhlornu kiselinu |
| 4. Titrimetrijske metode- Stvaranje fluoroscentnih kompleksa sa Ca | Stvaraju se fluorescentni kompleksi sa kalcijem, kao Ca-kalcein
Kompleks ekscitira na 490 nm, a emituje isto kao i magnezij, na 530 nm.
Helatori: EDTA,EGTA - smanjuje se intenzitet fluorescencije njihovim dodatkom, jer istiskuje Ca iz veze sa kalceinom |
| 4. Titrimetrijske metode- Stvaranje fluoroscentnih kompleksa sa Ca reakcije | Ca + kalcein -> Ca-kalcein
Titracija kompleksa: EGTA + Ca-kalcein -> pad fluorescencije... ekscitacija na 490nm a emisija na 530 nm
Stabilnost 4 dana na +4, zaleđen mjesecima
Interferenca: hemoglobin i bilirubin (hemoliza i ikterus) |
| 5. SPEKTROFOTOMETRIJSKE METODE Ca - reakcija, interference | Prvo, imamo razne komplekse:
• ‘Kalcon
• Kalcein- fluorescein kompleksi
• Kalcifast plavo
• O. krezolftalein
• Glioksal
Radi se u baznoj sredini, alkalizacija?
Ca 2+ + o-krezol ftalein -----OH------> nastaje crveni kompleks, a max aps je 520 do 570 nm
Stabilizacija produkta se vrši sa KCN
8 - hidroksi hinolin – eliminacija interferenci
Interference: hemoliza, lipemični i ikterični uzorci |
| Analitika jonskog Ca | 1. ANALIZATORI ZA SLOBODNI KALCIJUM
2. JONSELEKTIVNE ELEKTRODE
2. STARIJE METODE |
| 1. ANALIZATORI ZA SLOBODNI KALCIJUM | Potenciometrija kao princip - mjeri se razlika napona između Ca ili pH referentne elektorde za kalibratore na pH= 7,4, a T = 37 stepeni
Stvarni jonski Ca |
| 2. JONSELEKTIVNE ELEKTRODE | Izuzetno osjetljive na promjene pH
Mjeri se razlika potencijala Ca i referentne elektrode
Uzorak je heparinizirana plazma
Preanalitičke greske:, staza, zatezanje ruke, hemoliza
Varijacije: starosna dob, spol, doba godine, trudnoca |
| Kako pripremiti uzorak za analitiku fosfata | • što prije centrifugirati krv i odvojiti serum
• stajanje duze od 2-3 h dovodi do rasta fosfata, zbog djelovanja fosfataze koja razlaže estere
• hemoliza- povecani fosfati
• trombocitoza- povecani fosfati |
| Detekcija fosfata | a) UV apsorpcija - određuje se koncentracija amonijevog fosformolibdata na 340nm - UV područje
b) Reducirajuci agensi
-aminonaftol sulfonska kiselina
- stanohlorid
- metil p aminofenol sulfat
-feroamonij sulfat
Askorbat |
| 3. ENZIMATSKE METODE fosfata | a) Preko mjerenja NADPH - uz faktore koji omogućavaju aktivaciju NADPH u zavisnosti šta nastaje, pad ili povečanje apsorbance
- Glikogen fosforilaza
- Fosfoglukomutaza
- G6PDH
b) Preko H2O2 uz hromogeni supstrat
purin nukleozid fosforilaza
HPO4 2- + inozin -------------------------- > hipoksantin + riboza-1-P
Hipoksantin + 2 H2O +2 O2 -----ksantin oksidaza---> mokracna kiselina +2 H2O2
H2O2+ hromogeni supstrat ------peroksidaza-----> crveno- ljubicasti kompleks (555nm)
Supstrat: N- etil-N(3 metilfenil) N acetil etilendiamin
c) Preko NADH- fosforilaza, fosfoglukomutaza, G6PDH |
