Buscar
Estás en modo de exploración. debe iniciar sesión para usar MEMORY

   Inicia sesión para empezar

level: Level 1 of Analitika KALCIJA

Questions and Answers List

level questions: Level 1 of Analitika KALCIJA

QuestionAnswer
Analitika Ca, osnov i priprema uzorkaPriprema uzoraka, kad je u pitanju ukupni Ca2+ (ukupni + jonizirani) : Moguće je koristiti serum, heparizirana plazma, urin Urin : prezervacija sa 5-10 ml 6M HCl Ca jonizirani, uzorci: serum, heparizirana krv
UKUPNI Ca metode nabrojati1. 1. Plamena emisiona spektrometrija 2. AAS 5. SPEKTROFOTOMETRIJSKE METODE 3. Masena spekrometrija--- definitivna metoda 4. Titrimetrijske metode- Stvaranje fluoroscentnih kompleksa sa Ca
1. Plamena emisiona spektrometrija - osnove reakcije i emisijaCa2+ + toplota + 2e- ----> Ca0----> toplota----> fotoni 422,7nm 554 nm 622 nm Ne koristi se radi interferencija...
2. AAS kalcija - kako se izvodia) Prvo moramo reducirati interferencije: Faza dilucije 1:50 sa lantan – HCl b) Aspiracija u zrak/acetilen c) Apsorbanca proporcionalna broju atoma Ca u ground stanju
AAS kalcija interferencijeSmetaju fosfati i oksalati i dodajemo stroncij da ih blokiramo Smetaju i proteini a za njih dodajemo perhlornu kiselinu
4. Titrimetrijske metode- Stvaranje fluoroscentnih kompleksa sa CaStvaraju se fluorescentni kompleksi sa kalcijem, kao Ca-kalcein Kompleks ekscitira na 490 nm, a emituje isto kao i magnezij, na 530 nm. Helatori: EDTA,EGTA - smanjuje se intenzitet fluorescencije njihovim dodatkom, jer istiskuje Ca iz veze sa kalceinom
4. Titrimetrijske metode- Stvaranje fluoroscentnih kompleksa sa Ca reakcijeCa + kalcein -> Ca-kalcein Titracija kompleksa: EGTA + Ca-kalcein -> pad fluorescencije... ekscitacija na 490nm a emisija na 530 nm Stabilnost 4 dana na +4, zaleđen mjesecima Interferenca: hemoglobin i bilirubin (hemoliza i ikterus)
5. SPEKTROFOTOMETRIJSKE METODE Ca - reakcija, interferencePrvo, imamo razne komplekse: • ‘Kalcon • Kalcein- fluorescein kompleksi • Kalcifast plavo • O. krezolftalein • Glioksal Radi se u baznoj sredini, alkalizacija? Ca 2+ + o-krezol ftalein -----OH------> nastaje crveni kompleks, a max aps je 520 do 570 nm Stabilizacija produkta se vrši sa KCN 8 - hidroksi hinolin – eliminacija interferenci Interference: hemoliza, lipemični i ikterični uzorci
Analitika jonskog Ca1. ANALIZATORI ZA SLOBODNI KALCIJUM 2. JONSELEKTIVNE ELEKTRODE 2. STARIJE METODE
1. ANALIZATORI ZA SLOBODNI KALCIJUMPotenciometrija kao princip - mjeri se razlika napona između Ca ili pH referentne elektorde za kalibratore na pH= 7,4, a T = 37 stepeni Stvarni jonski Ca
2. JONSELEKTIVNE ELEKTRODEIzuzetno osjetljive na promjene pH Mjeri se razlika potencijala Ca i referentne elektrode Uzorak je heparinizirana plazma Preanalitičke greske:, staza, zatezanje ruke, hemoliza Varijacije: starosna dob, spol, doba godine, trudnoca
Kako pripremiti uzorak za analitiku fosfata• što prije centrifugirati krv i odvojiti serum • stajanje duze od 2-3 h dovodi do rasta fosfata, zbog djelovanja fosfataze koja razlaže estere • hemoliza- povecani fosfati • trombocitoza- povecani fosfati
Detekcija fosfataa) UV apsorpcija - određuje se koncentracija amonijevog fosformolibdata na 340nm - UV područje b) Reducirajuci agensi -aminonaftol sulfonska kiselina - stanohlorid - metil p aminofenol sulfat -feroamonij sulfat Askorbat
3. ENZIMATSKE METODE fosfataa) Preko mjerenja NADPH - uz faktore koji omogućavaju aktivaciju NADPH u zavisnosti šta nastaje, pad ili povečanje apsorbance - Glikogen fosforilaza - Fosfoglukomutaza - G6PDH b) Preko H2O2 uz hromogeni supstrat purin nukleozid fosforilaza HPO4 2- + inozin -------------------------- > hipoksantin + riboza-1-P Hipoksantin + 2 H2O +2 O2 -----ksantin oksidaza---> mokracna kiselina +2 H2O2 H2O2+ hromogeni supstrat ------peroksidaza-----> crveno- ljubicasti kompleks (555nm) Supstrat: N- etil-N(3 metilfenil) N acetil etilendiamin c) Preko NADH- fosforilaza, fosfoglukomutaza, G6PDH